奥利亚罗非鱼全人工繁殖试验

     奥利亚罗非鱼（Oreochromis aureus），系鲈形目、丽鱼科、罗非鱼属，是原产于非洲的一种热带中小型鱼类，它与尼罗罗非鱼杂交的后代奥尼罗非鱼（奥利亚罗非鱼♂×尼罗罗非鱼♀），具有高雄性率和明显的的生长优势，比双亲生长快20%～30%，因此多用于做生产奥尼罗非鱼的亲本。奥利亚罗非鱼繁殖条件要求低，具有性成熟早、产卵周期短等特点，只要温度适宜，就能在小面积静水水体中一年多次繁殖，在生产上比较容易得到大量的苗种，因此，很少有人对其进行人工繁殖研究。随着我国罗非鱼的养殖不断发展，对罗非鱼的相关研究也不断开展，尤其在罗非鱼的育种方面，如进行雌核发育，科间杂交等，这就需要通过人工繁殖来获得实验材料。由于罗非鱼是一年多次产卵型鱼类，它的性腺发育是非同步性的，进行罗非鱼人工繁殖比较困难，很难获得成熟卵，从而影响罗非鱼相关研究工作的进一步深入。经过几年的摸索，初步掌握了奥利亚罗非鱼人工繁殖技术，2005年进行了6批奥利亚罗非鱼人工繁殖，现将人工繁殖试验情况总结如下。    1 材料与方法    1.1 亲鱼来源与培育    亲本为淡水渔业研究中心保存的纯种奥利亚罗非鱼，年龄1～3龄，体重150～750g。选择体形完整、体质健壮的做亲鱼，每亩按雌雄比3∶1放养600～800尾。亲鱼放养前每亩施经发酵的粪肥250～500kg培养天然饵料;亲鱼下塘后，投喂饼粕、麸皮、配合饲料等人工饵料，日投饵量为鱼体重的5%左右。另外，定期补充青菜叶、浮萍等青饲料。投饲按"四定"原则，池水保持"肥、活、嫩、爽"。    1.2 产卵池和孵化设施    产卵池为1.2m×0.8m×1.0m的玻璃水簇箱，池水用曝气3d以上的自来水。鱼卵在玻璃培养缸和直径15cm的培养皿中孵化。    1.3 雌、雄鱼及成熟度的判别    雌鱼腹部有三个孔，即肛门、生殖孔和泌尿孔，泌尿孔在生殖突起的顶端，生殖孔开在肛门和泌尿孔之间，为"一"字形的狭长开口，与生殖突垂直。雄鱼只有两个开孔，即肛门和尿殖孔。在繁殖季节，雄鱼体色鲜艳，呈深紫色或紫褐色，背鳍、胸鳍、尾鳍边缘呈艳丽的桔红色，雌鱼体色则呈灰黄色。性成熟的雌鱼在生殖季节性腺轮廓也不明显，性腺成熟好的雌鱼，顺着卵巢方向稍用力挤压，能挤出卵，且卵粒游离，饱满有弹性。如果鱼口中有卵，则是刚产过卵不久，不能用于催产;如果不能挤出卵或挤出的卵大小不均，且粘连在一起，则成熟度不够，不适合催产;如挤出的卵粒无光泽，塌扁，用手轻碰就破裂，则过熟不适合催产。性成熟的雄鱼轻挤腹部，会有透明、稍粘稠的液体从尿殖孔射出。    1.4 催产与人工授精    采用一次注射法，胸鳍基部注射，剂量为雌鱼4mgDOM＋6μgLRH～A/kg，雄鱼减半，每尾鱼的注射量控制在1mL内。催产后的亲鱼按雌雄比1∶1放入水簇箱，每个水簇箱放5～7对亲鱼，增氧泵24h增氧。鱼发情时，将雌、雄亲鱼捞起，用毛巾擦干，将雌鱼卵和雄鱼精液挤入小瓷盆中，用羽毛搅动1min，再加入适量的生理盐水，静止放置2～3min后，倒去生理盐水，然后将受精卵进行孵化。    1.5 受精卵孵化与胚胎发育观察    将受精卵转移到培养皿或培养缸中静水孵化，每个培养皿放卵50～100粒，培养缸放卵200～300粒。每2h用吸管吹动鱼卵1次，发现破卵、死卵立即吸除，定时换水，保持水质清新。胚胎发育观察的材料为人工授精的受精卵，在实验室内孵化并进行连续观察记录。观察期间孵化水温是26～28℃。    1.6 鱼苗培育    鱼苗出膜3d后，腹腔背部出现鳔点，肠管与肛门相通，开始投喂鸡蛋黄、轮虫等或小型枝角类和桡足类，一周后投喂粉状配合饲料。鱼苗开口后7～10d在培养缸中培养，之后放入水簇箱培养，长到2～3cm时放入池塘养殖。    2 结果    2.1 亲鱼选择、催产情况    从5月30日到8月13日，每隔15d左右做一次人工繁殖试验，共做了6次，每次从400尾雌鱼中能挑选出6～10尾成熟度好的亲鱼。6次共催产雌鱼40尾，25尾产卵，催产率为62.5%。    2.2 效应时间和产卵行为    水温26～28℃时，效应时间为28～36h。产卵前，个体之间因占地盘不停地打斗，雄鱼一般势强，占据水簇箱的下层和水簇箱边角处，雌鱼一般势弱，多被赶到水簇箱上层。快要产卵时，雌鱼生殖孔会突出3～5mm，通常会下沉到水簇箱底部，占据一处，并有做窝行为：不时地将占据处的杂质、脏物衔开。在雌鱼做窝期间，常有雄鱼与之嬉咬、追逐、打转，直到雌鱼产卵，雄鱼排精。卵分数次产出，每次间隔2～3min，产出的卵粒随即吸入口中，鱼卵在雌鱼口腔内孵化。150g的雌鱼产卵1200粒左右。    2.3 受精卵孵化和胚胎发育    奥利亚罗非鱼卵为沉性卵、无黏性，形如鸭梨，充满卵黄，尖的一端为动物极。卵的其长径为2.06～2.40mm，宽径为1.53～1.80mm，卵径大小随亲鱼大小而有差异。受精卵吸水后膨胀，饱满且富有弹性，卵膜透明，在解剖镜下可清楚看到胚胎发育情况。受精卵30min左右形成胚盘，开始细胞分裂，胚胎发育经过胚盘形成期、卵裂期（2细胞期，4细胞期，8细胞期，16细胞期，多细胞期），囊胚期（高囊胚期，平囊胚期）、原肠期（原肠初期，原肠中期，原肠末期）、神经胚期（神经胚期，胚孔封闭期）、器官形成期（视泡形成期，听泡形成期，心脏形成期）、血液循环期、和出膜期。水温26～28℃时，受精卵孵化时间为78～90h，整个胚胎发育期积温约需要2100℃.h。    2.4 鱼苗培育效果    人工条件下奥利亚罗非鱼鱼苗很容易培养，除畸形鱼苗在出膜2～3d后死亡外，正常苗基本都能存活。    3 讨论与分析    由于奥利亚罗非鱼性腺发育不同步，很难选出成熟度合适的雌鱼。在繁殖季节，性成熟的雌鱼性腺要冬成熟度不够，要么刚刚产过卵，成熟度正好的很少，一般选中率只有1.5%～2.5%左右。因此，人工繁殖最好在奥利亚罗非鱼出越冬池后第一次产卵（15d左右）时开始。因为在奥利亚罗非鱼出越冬池后到第一次产卵期间，其性腺发育比较一至，选出成熟度好的亲鱼机率高些。另外，在繁殖旺盛期（6月初到7月底），也能选出较多的亲鱼。选出的亲鱼必须尽快催产，否则就会过熟或自产。    使用脑垂体（PC）、绒毛膜促性腺激素（HCG）、地欧酮（DOM）、鱼用促排卵素（LRH-A2）做不同的组合催产奥利亚罗非鱼，结果发现使用DOM和LRH-A2组合催产效果较好，但催产率也只有60%左右，因此，催产剂的组合和剂量还有待优化。奥利亚罗非鱼人工催产效应时间很难把握，选出的雌亲鱼催产效应时间差别较大，这可能是因为其一年多次产卵，性腺发育不一至造成的。亲鱼成熟度好则效应时间短，成熟度差则效应时间长;个体小则效应时间短，个体大则效应时间长，不同的个体，效应时间相差8～10h。一般100g～150g雌鱼催产效果较好。另外，奥利亚罗非鱼发情时的行为也不是特别明显，在人工环境下很难把它们抢占地盘的打斗和发情时的嬉咬分开，只有发现雌鱼开始产卵才能认为是效应时间到了。试验曾用水泥池做产卵池，结果很难发现奥利亚罗非鱼什么时候开始发情产卵，用玻璃水簇箱做产卵池也是为了便于观察它们的活动、产卵情况。雌鱼在快要产卵时有两个前兆，一是生殖孔会突出3～5mm，二是有做窝行为。当发现这两个特征时，说明效应时间快到了，随时都有可能产卵，这时要特别注意。    奥利亚罗非鱼卵孵化时间较长，水温在26～28℃时，鱼卵从受精到出膜要78h以上。在孵化期间，鱼卵很容易长水霉死亡。在少量鱼卵孵化时，用曝气的冷开可避免鱼卵长水霉。由于奥利亚罗非鱼卵的卵黄很多，几乎充满整个鱼卵，鱼卵长时间孵化容易破裂，造成卵黄外漏。尤其是在孵化到原肠期后，畸形卵和未受精卵都会破裂，正常的受精卵这时也容易破裂。当孵化水温32℃以上时，即使发育良好的卵也会在孵化前因卵膜破裂卵黄外漏而全部死亡。鱼卵破裂后漏出的卵黄还会使水质迅速恶化，从而引起其它正常鱼卵缺氧死亡。在培养皿、玻璃缸中静水孵化时，要及时把破裂的鱼卵及漏出卵黄吸除，并要经常换水。